control就是对照的意思 就是对照的小干扰RNA 它没有干扰目的基因的作用，设计的时候人们一般会设计一个乱序的非特异性的干扰RNA 来做对照组 就是指做对照用的siRNA，一般是一段随机序列，不会与DNA结合，不会影响DNA的转录。

有趣的是，具有CMV启动子和最小的polyA尾的RNA聚合酶II表达元件被用于这个实验，为设计组织特异性或者可诱导的siRNA载体打开了大门总的来说，siRNA的第一个体内实验已经进行，其他有重要意义的基因有望于很快作为靶标开展研究至今为止的。

原代细胞较难转染，可以先构建慢病毒，再用慢病毒进行转染 1将actin基因，放入慢病毒融合表达载体，与荧光蛋白GFP融合表达，注意避免移码突变 2然后将重组质粒以及辅助质粒共转染细胞，可以用脂质体法，慢病毒配套；siRNA和shRNA的设计有何区别 siRNA是小干扰rnashRNA是小发卡rna，一段rna单链，形成茎环结构部分双链的小rna siRNA可以是天然产生也可以是人工导入的，shRNA一般都是指人工的 shRNA多是用dna载体构建，在宿主内自行转录成；宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应，其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA，即siRNAsiRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链，继之由反义siRNA再与体内一些酶包括内切酶。

不会，siRNA识别靶序列是有高度特异性的，因为降解首先在相对于siRNA来说的中央位置发生，所以这些中央的碱基位点就显得极为重要，一旦发生错配就会严重抑制RNAi的效应；阻碍了与siRNA 的识别因此，不仅要选合适的靶序列，而且需要反复试验另一个重要的原因是病毒子代的突变率较高， 这使病毒可逃避siRNA 的识别为了克服这个障碍，所选病毒RNA的靶序列必须是高度保守的， 或者设计数对siRNA同时作用23总。

RNAi的特异性众多实验结果表明导入生物体的siRNA只能引起同源基因表达的抑制，而无关基因不受影响而且，在siRNA序列中配对的1921nt中如果只改变一个核苷酸，就可以使该siRNA序列不对靶mRNA起作用，证明RNAi有明显的特异性；一般有敲低基因的realtime PCR和western blot检测，以后者为准shRNA是short hairpin RNA 的缩写翻译为“短发夹RNA”shRNA包括两个短反向重复序列在活体中输送“小干扰RNA”siRNA的一种办法是，将siRNA序列作为。